Gastrointestinale Infektion (Multiplex-Assay)

Indikation

Verdacht auf Infektion mit gastrointestinalen Viren:

• Adenovirus Typ 40/42
• Rotavirus
• Astrovirus

Zahlenmäßig ist der Gastrointestinaltrakt nach den Atemwegsinfektionen am häufigsten von Infektionskrankheiten betroffen. Symptome sind Diarrhoe, Übelkeit, Erbrechen, abdominelle Krämpfe und Dehydrierung. Als Hauptverursacher der viral bedingten Durchfallerkrankungen kommen Rotaviren, Adenoviren, Astroviren sowie die beiden zur Familie der Caliciviridae gerhörenden Noroviren und Sapoviren in Betracht.

Die Krankheitsdauer ist kurz, sie beträgt in der Regel 1-8 Tage. Im Vordergrund der histopathologischen Veränderung sind Dünndarm-Epithelzellschädigungen. In ihrer schwersten Form führen diese Veränderungen zur Dehydrierung, wobei besonders Säuglinge, Kleinkinder, alte Patienten und Immunsupprimierte betroffen sind.
Gastrointestinale Erreger verursachen ähnliche Symptome, somit lässt sich eine Diagnose nicht allein anhand des klinischen Bildes stellen.
In besonders schweren Erkrankungen bzw. Infektionen bei Immunsupprimierten ist ein Erregerdirektnachweis anzustreben. Die Methode der Wahl ist die Polymerase-Kettenreaktion. Aufgrund der Vielzahl der möglichen Erreger als Multiplex Analyse.

Methode

Polymerase-Kettenreaktion

RIDA^®GENE Viral Stool Panel II ist eine multiplex real-time RT-PCR zum direkten qualitativen Nachweis und zur Differenzierung von:
Rotavirus, Adenovirus und Astrovirus.

Die Amplifikation und Detektion basiert auf dem TaqMan-Format.
Extrahierte RNA wird in einem Reaktionsansatz zunächst revers in die entsprechende cDNA transkribiert und diese wird anschließend mittels PCR amplifiziert. Während des Annealings hybridisieren sowohl die beiden spezifischen PCR-Primer als auch eine, für dieses Detektionsverfahren erforderliche, spezifische fluorogene Sonde am nachzuweisenden Genom. Im gleichzeitig ablaufenden Elongationsschritt (Zwei-Schritt-PCR) wird diese Sonde von der 5`-3`Exonuklease-Aktivität der Taq-Polymerase gespalten, wodurch das Fluoreszenzsignal ansteigt. Übersteigt das Meßsignal einen von der Software des Gerätes berechneten cut-off Wert, so gilt die Probe als "positiv" und der entsprechende PCR-Zyklus, in dem die Fluoreszenz diesen "threshold" übersteigt, wird als "threshold cycle" C_Tdefiniert. 

Reagenzien: RIDA®GENE Viral Stool Panel II (R-Biopharm)
Gerät: 7500 Real Time PCR System (ABI)

Material

 Stuhlprobe (nativ)

Präanalytik

Das Untersuchungmateriel sollte taggleich zum Labor transportiert werden.
Die Untersuchungsproben werden direkt nach Probeneingang bearbeitet oder bei -20 °C gelagert.

Hinweise

Beurteilung:

Der positive Nachweis eines Virus belegt eine entsprechende Infektion.

Verfahrenskenndaten

Viral Stool Panel II real-time RT-PCR hat eine Nachweisgrenze von ≥ 50 RNA-, bzw. ≥ 50 DNA-Kopien/Reaktion (Herstellerangaben).

Sonstiges

Infektionsschutzgesetz:

Gemäß § 7 Abs. ist der direkte Nachweis von Rotavirus, soweit er auf eine akute Infektion hinweist, namentlich dem Gesundheitsamt zu melden.

Gemäß § 7 Abs. ist der direkte Nachweis von Norovirus, soweit er auf eine akute Infektion hinweist, namentlich dem Gesundheitsamt zu melden.

Literatur:

• Medizinische Mikrobiologie und Infektiologie
  (Hrsg.: S. Suerbaum, G-D. Burchard, H.E. Kaufmann, T.F. Schulz) 
  Springer Verlag 2020 9. Auflage 
  
  
• Labor u. Diagnose
   (L. Thomas, Hrsg.) 
  TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main 2012 8. Auflage
  
  
• www.rki.de 
  RKI-Ratgeber
  RKI – Infektionskrankheiten A-Z