Resterythrozyten in Blutprodukten

Indikation

Qualitätskontrolle von Blutprodukten entsprechend der Richtlinie zur Gewinnung von Blut und Blutbestandteilen und zur Anwendung von Blutprodukten (Hämotherapie), Gesamtnovelle 2017.

Methode

Die Bestimmung der Resterythrozyten erfolgt mithilfe der Durchflusszytometrie. Diese Methodik kann mit guter Empfindlichkeit kleine Zellpopulationen differenzieren.

Hierbei werden Erythrozyten in der Probe mit einem monoklonalen Antikörper gegen Glykophorin A (CD235a), der mit Phycoerythrin (PE) konjugiert ist, nachgewiesen. Die Absolutzählung der Resterythrozyten wird durch den Zusatz chargenkalibrierter Partikel mit bekannter Konzentration, die mit einem Breitbandfluorochrom belegt sind, möglich. Die Diskriminierung der Erythrozyten von den Testpartikeln erfolgt über die unterschiedliche Intensität der linear und logarithmisch verstärkten Laser-vorwärts-Streulichtsignale sowie die Fluoreszenzintensität im Fluoroszenzkanal 2 (575 nm) und 3 (620 nm) in einem entsprechenden Gate. Debris, ungefärbte Thrombozyten und Leukozyten werden auf diese Weise von der Erfassung ausgeschlossen. Die Berechnung der Erythrozytenkonzentration pro µl erfolgt anhand eines Kalibrationsfaktors und einer speziellen CAL-Region in Echtzeit.

Gerät: NaviosEX (Fa. Beckman Coulter)

Material

• Pool-Thrombozytenkonzentrate (4 Spender; Matrix CPD Plasma)
• Thromboyztenkonzentrate aus Apherese (1 Spender; Matrix CPD Plasma)
• Frischplasma in CPD

Präanalytik

Die Abnahme der zu testenden Probe erfolgt aus dem Piloten der Spenderblut-Konserven vom gleich Tag. Die Proben müssen innerhalb von 24 Stunden nach Abnahme aus der Konserve gemessen werden.

Referenzbereich

* Richtlinie zur Gewinnung von Blut und Blutbestandteilen und zur Anwendung von Blutprodukten (Hämotherapie), Gesamtnovelle 2017

Hinweise

Das Verfahren erfolgt außerhalb der Akkreditierung.
Das Verfahren erfolgt als "Laboratory developed Test" (LDT).
Eine Konformitätserklärung liegt vor.

Verfahrenskenndaten

Der Messbereich für eine Quantifizierung liegt zwischen 66/µl und 4000/µl.
Proben außerhalb der oberen Messbereichsgrenze werden verdünnt erneut gemessen. Die Nachweisgrenze des Verfahrens (LoD) liegt bei 6,6/µl.

Sonstiges

Literaturangaben:

• M. Wötzel: Restzellen in Blutprodukten in: U. Sack, A. Tarnok, G. Rothe: Zelluläre Diagnostik; Grundlagen, Methoden und klinische Anwendungen der Durchflusszytometrie, Karger 2007
• Richtlinie zur Gewinnung von Blut und Blutbestandteilen und zur Anwendung von Blutprodukten (Hämotherapie), Gesamtnovelle 2017