Mycoplasma pneumoniae-PCR

Indikation

M. pneumoniae ruft in der Regel eine Tracheobronchitis hervor und in 5-10 % der Fälle eine interstistielle Pneumonie. Die Übertragung von Mycoplasma pneumoniae erfolgt über infektiöse Tröpfchen.  Nach einer Inkubationszeit von 12-20 Tagen beginnt die Symptomatik in den ersten Tagen zunächst schleichend. Anschließend wird der Husten quälend, die Temperaturen sowie das Krankheitsgefühl steigen.

M.-pneumoniae interferiert mit dem Immunsystem so dass es zu folgenden Begleitreaktionen kommen kann:

• Induktion von Kälteagglutininen
• Polyklonale B-Zell-Aktivierung
• Zirkulierende Immunkomplexe
• T-Zell-Stimulation

Die kuturelle Anzucht von M. pneumoniae ist aufgrund von besonderen kulturellen Ansprüchen sowie sehr langsamen Teilungen des Bakteriums schwierig und langwierig. Der kulturelle Nachweis von M. pneumoniaebenötigt 1 - 2 Wochen.

Die Methode der Wahl für den direkten Erregernachweis sind Real-Time PCR-Verfahren.

Methode

Polymerasekettenreaktion (PCR):

Die Amplifikation und Detektion basiert auf dem TaqMan-Format.

Erreger-DNA wird mittels PCR amplifiziert. Während des Annealings hybridisieren sowohl die beiden spezifischen PCR-Primer als auch zwei für dieses Detektionsverfahren erforderliche, spezifische fluorogene Sonde am nachzuweisenden Amplifikat. Im gleichzeitig ablaufenden Extensionsschritt (Zwei-Schritt-PCR) wird diese Sonde von der 5`-3`Exonuklease-Aktivität der Taq-Polymerase gespalten, wodurch das Fluoreszenzsignal ansteigt. Übersteigt das Messsignal einen von der Software des Gerätes berechneten cut-off Wert, so gilt die Probe als "positiv" und der entsprechende PCR-Zyklus, in dem die Fluoreszenz diesen "threshold" übersteigt, wird als "threshold cycle" C_T definiert.
Die PCR wird im Cytoadhesin (p1)-Gen durchgeführt.

Gerät: StepOne Real Time PCR System (ABI)

Material

• Nasopharyngeale Sekrete (Kinder)
• Nasophargyealer Abstrich (Kinder)
• Sputum (Erwachsene)
• Bronchialsekret (Erwachsene)
• Bronchoalveoläre Lavage
• Biopsien

Präanalytik

Das Untersuchungmateriel sollte taggleich zum Labor transportiert werden. Eine sofortige Vorbereitung des Materials ist erforderlich für eine optimale Aussagekraft des Ergebnisses.

Die Untersuchungsproben werden direkt nach Probeneingang bearbeitet oder bei -20 °C gelagert.

Hinweise

Beurteilung:

Der direkte Erregernachweis belegt eine Infektion mit Mycoplasma pneumoniae.

Sonstiges

Literatur:

• Medizinische Mikrobiologie und Infektiologie
  (Hrsg.: S. Suerbaum, G-D. Burchard, H.E. Kaufmann, T.F. Schulz)
  Springer Verlag 2020 9. Auflage