Zellulärer Immundefekt (Durchflusszytometrie)

Indikation

Im Rahmen der Diagnostik erworbener und angeborener Immundefekte ist die Differenzierung der Lymphozytensubpopulationen (Syn. quantitativer zellulärer Immunstatus, quantitatives Immunprofil; Lymphozytendifferenzierung) ein wichtiger diagnostischer Baustein. Außerdem werden wichtige Zusatzinformationen bei der Diagnose und Verlaufsbeurteilung bei chronischen Infektionen, Autoimmunerkrankungen oder Tumoren geliefert. Folgende Zellpopulationen werden quantitativ untersucht:
T-Zellen inkl. CD4+ und CD8+ Subpopulationen (Naive, Central Memory, Effektor Memory, Terminal differenziert), TCRγδ-Zellen, NK-Zellen, B-Zellen inkl. B-Subpopulationen (CD5+ und CD5- Unreife Transitionale B-Zellen, Reife Naive B-Zellen CD21low, Non-switched memory B-Zellen, Switched Memory B-Zellen, Plasmablasten), Thymusreserve (CD31+ Recent thymic emigrants), sowie der Aktivierungsgrad der T-Zellsubpopulationen.

Bei der Interpretation des Befundes arbeiten wir unter Einbeziehung aller Laborbefunde, der Klinik und Anamnese unserer Patient:innen in enger Kooperation mit den klinischen Immunologen der Ambulanz für Immunologie und Rheumatologie des Zentrums für Kinder- und Jugendmedizin am Helios Klinikum Krefeld.

Methode

Durchflusszytometrie
Durchflusszytometrische Untersuchung entsprechend der EuroFlow-SOPs und CE-IVD zertifizierten Panels (PIDOT, Fa. Cytognos), sowie EuroFlow Tubes (Pre-GC, SCID/RTE).

Durchflusszytometer: BD FACSLyric (Fa. BD Biosciences)

Material

EDTA-Vollblut (peripheres Blut mind. 2,7 ml)

Präanalytik

Die Probe sollte innerhalb von 24 Stunden im Labor sein.
Eine Analyse ist in Ausnahmefällen bis zu 72 Stunden möglich.
Lagerung und Transport bei Raumtemperatur.

Referenzbereich

Für die Lymphozytensubpopulationen werden die altesabhängigen Referenzwerte aus folgender Quelle zu Grunde gelegt:
Supplements 4 The EuroFlow PID Orientation Tube for Flow Cytometric Diagnostic Screening of Primary Immunodeficiency of the Lymphoid System; van der Burg et al.; Frontiers in Immunology; 2019

Für die B-Zellsubpopulationen unreife transitionale CD5+ und CD5- B-Zellen werden die altersabhängigen Referenzbereiche folgender Quelle zu Grunde gelegt:
Supplements 2 Dissection of the Pre-Germinal Center B-Cell Maturation Pathway in Common Variable Immunodeficiency Based on Standardized Flow Cytometric EuroFlow Tools; del Pino-Molina; Frontiers in Immunology; 2021

Für die B-Zellsubpopulationen CD27-IgD- doppelt negativer B-Zellen (DNB), Reifer naiver B-Zellen CD21+ und CD21low werden die altersabhängigen Referenzbereiche folgender Quelle zu Grunde gelegt:
Reference values for B cell subpopulations from infancy to adulthood; H. Morbach et al.; Clin. and Exp. Immunol.; 2010

Für die T-Zellpopulation der Recent Thymic Emigrants (RTE) werden die altersabhängigen Referenzbereiche folgender Quelle zu Grunde gelegt:
Paediatric Reference Values for the Peripheral T cell Compartment; Schatorjé; Clinical Immunology; 2011

Hinweise

Das Verfahren erfolgt in Teilen als "Laboratory developed Test" (LDT) bzw. "in-house IVD".
Eine Konformitätserklärung liegt vor.

Konformitätserklärung:

KR_IM_FB_Konform_Klinische Diagnostik Durchflusszytometrie.pdf (labormedizin-krefeld.de)

Sonstiges

Literaturangaben:

• EuroFlow-Based Flowcytometric Diagnostic Screening and Classification of Primary Immunodeficiencies of the Lymphoid System; van Dongen, JJM et al.; Frontiers in Immunology
• Dissection of the Pre-Germinal Ceter B-Cell Maturation Pathway in Common Variable Immunodeficiency Based on Standardized Flow Cytometric EuroFlow Tools; del Pino-Molina, Lucia et al.;  Frontiers in Immunology
• The EuroFlow PID orientation tube for flow cytometric diagnostic screening of primary immunodeficiencies of the lymphoid system; van der Burg, M et al.; Frontiers in Immunology
• EuroFlow Standardized Approach to Diagnostic Immunophenotyping of Severe PID in Newborns and Young Children; Kalina, T et al.; Frontiers in Immunology
• EuroFlow antibody panels for standardized n-dimensional flow cytometric immunophenotyping of normal, reactive and malignant leukocytes; van Dongen, JJM et al.; Leukemia
• EuroFlow Analytical protocol: Composition and technical info of EuroFlow panels for PID Version 1.2 (14 September 2022)
• Reference values for B cell subpopulations from infancy to adulthood; H. Morbach et al.; Clin. and Exp. Immunol.; 2010
• Paediatric Refernce Values for the Peripheral T cell Compartment; Schatorjé; Clinical Immunology; 2021